圆二色光谱circular dichroism(简称cd)是应用最为广泛的测定蛋白质二级结构的方法,是研究稀溶液中蛋白质构象的一种快速、简单、较准确的方法光谱仪。它可以在溶液状态下测定,较接近其生理状态。而且测定方法快速简便,对构象变化灵敏,
根据cd谱法的原理和测试要求设计制成的仪器称为圆二色光谱仪光谱仪。它是目前研究蛋白质二级结构的主要手段之一,并已广泛应用于蛋白质的构象研究中。
【概念解析】
圆二色性:
光学活性分子对左、右圆偏振光的吸收不同,使左、右圆偏振光透过后变成椭圆偏振光,这种现象称为圆二色性光谱仪。
圆二色性常用椭圆θ度表示,是平面偏振光离开样品池的角度光谱仪。
圆二色光谱仪(cd)样品要求:
1. 测试时需要空白溶剂做对照扣背景光谱仪,麻烦样品及溶剂至少各备5ml;
2. 样品及溶剂的浓度对测试影响较大光谱仪,不宜过高或过低(浓度过高,会超电压,数据不准;浓度过低,没有信号):不同物质,最佳浓度不同,测试时不对浓度进行摸索
a. 如之前测过cd或有相关文献光谱仪,建议按对应浓度准备;
b. 如没测过cd或无文献光谱仪,但扫过紫外全谱,建议优选紫外浓度的一半配制样品,如不合适再调整(直接用紫外对应浓度,测cd的话浓度偏高);
c. 如以上均无光谱仪,建议按0.5mg/ml来配(蛋白质样品,浓度一般0.1-0.5mg/ml),但无法保证该浓度合适
【固体cd制样要求】
1. 固体cd需要10-20mg,最好是粉末样品,特殊样品可以具体沟通光谱仪。
2. 如果样品透过率不好,建议采用积分球模式光谱仪。
另外送样之前光谱仪,注意下样品保存温度,是否需要冰袋或者干冰,防止样品寄样时发生变质,影响测试结果.
常见问题
① 圆二色谱测试光谱仪,样品是溶在pbs中测吗?
是在pbs里面测试光谱仪,来样时最好溶解好,或者提供溶剂,要测试背景用的;
② 圆二色谱测试波长范围是紫外吸收的吗?浓度要求是多少?
紫外的波长;
紫外吸收测试的吸收值为1-2时的浓度是最佳的;
③ cd光谱是什么意思?
用于推断非对称分子的构型和构象的一种旋光光谱光谱仪。
④ cd谱是干什么的?
旋光测定是检测一个定波长条件下的比旋光度值,仅此一个波长的比旋光度值为零,不能确认它为消旋体光谱仪。cd图谱是在一定波长范围内测定的一系列数据,如果有cotton效应,应当认为它是一个光活异构体,cd谱是用来测分子的绝对构型的。
⑤ 如何解析cd谱,做天然药物化学的课题,分离到一个新的化合物,可看不懂cd谱,确定不了绝对构型光谱仪。
查找与你的新化合物结构相近已知化合物的cd文献,尽量多找几个,确定该类化合物cd谱与其构型的关系,一般cotton效应正负相反表示某个手性碳的构型相反,已知与未知对照,就基本可以确定了光谱仪。还可以用核磁氢谱的耦合常数来判断相对构型,一般顺式耦合常数大于反式耦合常数。
如果你分的化合物只是原来已知化合物取代基的不同,就找已知化合物的cd图对比确定;再有一种情况,如果分的化合物是结构的新颖,就找懂量子计算化学的人帮你用相关的软件模拟进行cd模拟,会把所有不同的构型的cd图模拟出来,你就把你现在的cd图比较,哪种构型的模拟图谱相似,你的绝对构型就是哪种光谱仪。
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